Occurrence of zoonotic Enterocytozoon bieneusi in cats in Brazil / Ocorrência de Enterocytozoon bieneusi zoonótico em gatos no Brasil

Abstract Enterocytozoon bieneusi is an opportunistic intestinal pathogen that infects humans and a wide variety of animals worldwide. Our aim in this study was to investigate the occurrence of E. bieneusi in a domestic cat population in Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brazil. Sixty fecal samples from diarrheic cats were subjected to polymerase chain reaction (PCR) and the amplicons were sequenced for identification. E. bieneusi was detected in two samples (3.3%), both identified as genotype D. This genotype has already been reported in animals and humans and is considered a zoonotic genotype. Our findings represent the first report of E. bieneusi in domestic cats in Brazil, reinforcing the importance of identifying this agent as a source of infection in animals and humans.

Resumo Enterocytozoon bieneusi é um patógeno intestinal oportunista que infecta humanos e uma variedade de animais em todo o mundo. O objetivo no presente estudo foi investigar a ocorrência de E. bieneusi em uma população de gatos domésticos em Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil. Sessenta amostras fecais de gatos diarréicos foram submetidas a reação em cadeia da polimerase (PCR) e os produtos de amplificação foram sequenciados para identificação molecular. E. bieneusi foi detectado em duas amostras (3,3%), ambos identificados como genótipo D. Esse genótipo tem sido relatado em animais e humanos e é considerado um genótipo zoonótico. Nossos resultados representam a primeira descrição de E. bieneusi em gatos domésticos no Brasil, reforçando a importância desse agente como fonte de infecção para animais e humanos.

Comparison of three staining methods for the detection of intestinal microspora Spp.

This study aimed to compare three staining methods including: Calcofluor white, Chromotrope and Quick Hot Gram chromotrope used in diagnosis of intestinal microsporidial spores. One hundred and seventy five stool specimens were collected from patients referred to Laboratory of Intestinal Protozoology at the School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences during 2012-2013. All of specimens were evaluated by nested PCR. The formalin-fixed stool samples were prepared from each specimen and dried at room temperature for 10 min, followed by 10 min methanol fixation. All the collected stool samples were evaluated blindly by calcofluor white, Chromotrope and Quick Hot Gram chromotrope staining methods separately. Microsporidial spores were recognized using Chromotrope, Quick Hot Gram chromotrope and Calcofluor white, in16 of 18 [88.8%], 17 of 18 [94.4%] and 18 of 18[100%] samples that were positive by nested PCR respectively. Regarding 14 stool samples that were negative by nested PCR, 14 cases were negative by chromotrope and Quick hot Gram chromotrope and 13 samples were negative by Calcofluor white. One discordant sample interpreted as false positive. Calcofluor white staining had the best performance for the detection of intestinal Microsprora spores and can be used as initial screen test for the detection of intestinal Microspora spp

Microsporidial keratoconjunctivitis in an immunocompetent patient with a past history of laser in situ keratomilieusis surgery.

Ocular infection with microsporidia has been documented in both immunocompetent and immunocompromised patients. Sources and mode of human infection with microsporidia have been difficult to ascertain although exposure to water may be an important risk factor. Of four genera that have been reported in human disease, only the genera Nosema, Encephalitozoon and Septata are documented to cause ocular infection. Here, in our case a healthy 30-year-old man who had undergone bilateral laser in situ keratomilieusis surgery two and half years back presented with a 10-day history of redness and 4-day history of blurring of vision in the right eye. On presentation, his best-corrected visual acuity was 20/20 partial in both eyes. Slit lamp examination revealed multiple pin head shaped infiltrates in the right cornea. Examination of the left eye was unremarkable. Based on microscopic demonstration of numerous microsporidial spores in the corneal scrapings, a diagnosis of microsporidial keratitoconjunctivitis was made. On treatment with oral albendazole, the cornea became clear with complete resolution of symptoms and signs within two weeks.

Prevalence of intestinal microsporidiosis in Human Immunodeficiency Virus-infected patients with diarrhea in major United States cities

To determine the prevalence of intestinal microsporidiosis in HIV-infected patients, we performed a prospective study of HIV-infected patients with diarrheal illnesses in three US hospitals and examined an observational database of HIV-infected patients in 10 US cities. Among 737 specimens from the three hospitals, results were positive for 11 (prevalence 1.5 percent); seven (64 percent) acquired HIV through male-to-male sexual contact, two (18 percent) through male-to-male sexual contact and injection drug use, and one (9 percent) through heterosexual contact; one (9 percent) had an undetermined mode of transmission. Median CD4 count within six months of diagnosis of microsporidiosis was 33 cells/µL (range 3 to 319 cells/µL). For the national observational database (n = 24,098), the overall prevalence of microsporidiosis was 0.16 percent. Prevalence of microsporidiosis among HIV-infected patients with diarrheal disease is low, and microsporidiosis is most often diagnosed in patients with very low CD4+ cell counts. Testing for microsporidia appears to be indicated, especially for patients with very low CD4+ cell counts.

Para determinar a prevalência de microsporidiose intestinal em pacientes infectados pelo HIV foi realizado um estudo prospectivo em três hospitais dos Estados Unidos da América do Norte (EUA) e analizada uma base de dados nacional composta de dados coletados de pacientes infectados pelo HIV em 10 cidades dos EUA. De um total de 737 amostras de fezes de pacientes infectados pelo HIV que apresentavam diarréia, amostras de 11 pacientes (prevalência de 1,5 por cento) foram positivas para microsporídios. Todos os positivos eram do sexo masculino e, entre eles, sete (64 por cento) pacientes adquiriram a infecção pelo HIV através de relação homossexual, dois (18 por cento) através de relação sexual e drogas injetáveis e um (9 por cento) através de contato heterosexual, enquanto que em um paciente o modo de transmissão do HIV não foi determinado. A contagem média de linfócitos CD4 realizada até seis meses do diagnóstico de microsporidiose foi de 33 células/microlitro (3 a 319 células/microlitro). A análise da base de dados nacional (n = 24.098) mostrou uma prevalência de microsporidiose de 0,16 por cento. A prevalência de microsporidiose em pacientes HIV-positivos com diarréia é baixa. Entretando, como a microsporidiose é mais frequentemente diagnosticada em pacientes com contagens de CD4 muito baixas, a indicação de pesquisa de microsporídios é justificada, especialmente para estes pacientes.

Diagnóstico laboratorial de enteroparasitoses oportunistas, com ênfase nas microsporidioses humanas, em Goiânia-GO / Laboratory diagnosis of opportunistic intestinal parasites with emphasis on human microsporidiosis, in Goiânia-Go

Os microsporídios são protozoários, emergentes e oportunistas, responsáveis por patologias de alta morbi-mortalidade, principalmente em indivíduos com distúrbios imunes. Este estudo visa determinar o perfil clínico-laboratorial destes agentes. No total, foram avaliados 723 pacientes divididos em dois grupos: I) Indivíduos imunodeprimidos/imunossuprimidos; II) Indivíduos aparentemente imunocompetentes. Estes, após livre e esclarecido consentimento, foram entrevistados e cederam amostras fecais, sendo todas submetidas a técnicas de HPJ, Rugai, Faust e colorações específicas para coccídios e microsporídios. A freqüência de microsporídios foi 1,3 por cento (5/393) no grupo I, enquanto no outro grupo foi quatro vezes menor. A ocorrência de outras enteroparasitoses oportunistas também foi maior no grupo I. Conclui-se, por um lado, que estes agentes estão em nosso meio, e por outro, necessitamos aprimorar o diagnóstico clínico e laboratorial, para definir a distribuição geográfica destes agentes no Estado de Goiás e no Brasil.

Microsporidia are emergent and opportunistic protozoa that are responsible for diseases with high morbidity and mortality, especially among individuals with immune disorders. This study had the aim of determining the clinical-laboratory profile of these agents. In total, 723 patients were evaluated, divided into two groups: I) Immunosuppressed/immunodepressed individuals; II) Apparently immunocompetent individuals. After obtaining free informed consent, these patients were interviewed and gave fecal samples. These samples were all subjected to the HPJ, Rugai and Faust techniques and to specific staining for Coccidia and Microsporidia. The frequency of Microsporidia was 1.3 percent (5/393) in group I, whereas it was a quarter of this in group II. The occurrence of other opportunistic intestinal parasites was also greater in group I. It was concluded, firstly, that these agents are present in our environment and, secondly, that there is a need to improve the clinical and laboratory diagnosis, in order to define the geographic distribution of these agents in the State of Goiás and throughout Brazil.

Microsporidiosis in a Brazilian University Hospital: case report

This is the report on a patient with chronic diarrhea caused by microsporidia. He is married, infected with HIV and has low CD4 cell count. The diagnosis was established through stool parasite search using concentration methods and Gram - chromotrope staining technique. Ileum biopsy was also performed in this case. The etiological diagnosis may be established in a clinical laboratory, by chromotrope staining technique in routine microscopic examination of stool specimens.

Este é o relato de caso de doente com diarréia crônica causada por Microsporidia. O doente era homem, casado, infectado com HIV e tinha baixa taxa de linfócitos CD4+. O diagnóstico foi feito em exame de fezes utilizando métodos de concentração e técnica de coloração de Gram-Chromotrope. Biópsia de íleo também foi realizada neste caso. O diagnóstico etiológico pode ser feito em laboratório clínico, por técnicas de coloração baseada em cromotrope na rotina da observação microscópica direta.

Microsporidia: emerging ocular pathogens.

Microsporidia are eukaryotic, spore forming obligate intracellular parasites, first recognized over 100 years ago. Microsporidia are becoming increasingly recognized as infectious pathogens causing intestinal, ocular, sinus, pulmonary, muscular and renal diseases, in both immunocompetent and immunosuppressed patients. Ocular microsporidiosis, though uncommon, could be isolated or part of systemic infections. It occurs mainly in two forms: keratoconjunctivitis form, mostly seen in immunocompromised individuals; stromal keratitis form seen in immunocompetent individuals. Recent reports indicate increasing number of cases of ocular microsporidiosis in immunocompetent individuals. The ocular cases present as superficial keratitis in AIDS patients, and these differ in presentation and clinical course from the cases seen in immunocompetent individuals which mainly appear to be as deep stromal keratitis. For most patients with infectious diseases, microbiological isolation and identification techniques offer the most rapid and specific determination of the etiologic agent, however this does not hold true for microsporidia, which are obligate intracellular parasites requiring cell culture systems for growth. Therefore, the diagnosis of microsporidiosis currently depends on morphological demonstration of the organisms themselves, either in scrapings or tissues. Although the diagnosis of microsporidiosis and identification of microsporidia by light microscopy have greatly improved during the last few years, species differentiation by these techniques is usually impossible and electron microscopy may be necessary. Immuno fluorescent-staining techniques have been developed for species differentiation of microsporidia, but the antibodies used in these procedures are available only at research laboratories at present. During the last 10 years, molecular techniques have been developed for the detection and species differentiation of microsporidia.

Primer diagnóstico de microsporidiosis humana en Uruguay / First diagnosis of microsporidiosis human in Uruguay

Los microsporidios son protozoarios conocidos desde hace mucho tiempo como causantes de plagas en invertebrados y vertebrados. En la década de 1980 se les reconoce como agentes etiológicos de diarrea en VIH-sida y posteriormente en trasplantados renales así como en personas inmunocompetentes (diarrea del viajero). El objetivo de este trabajo es comunicar el primer hallazgo de estos agentes en un paciente VIH-sida y contribuir al conocimiento de las características patogénicas y diagnósticas más importantes de los microsporidios. En 1998 en el Departamento de Parasitología se implementaron las técnicas de coloración para microsporidios, gram-cromotrope y tricrómica. El primer hallazgo se observó en un paciente VIH-sida, con diarrea de nueve meses de evolución; no se realizó tratamiento específico ya que concomitantemente presentaba una meningoencefalitis criptococócica, la que precipitó su fallecimiento. El reconocimiento de estos agentes oportunistas como causa de diarrea en Uruguay, contribuye al diagnóstico etiológico de la diarrea crónica en pacientes VIH-sida. En adelante, las coloraciones específicas de microsporidios deberían ser incluidas en el algoritmo diagnóstico para enteroparasitosis en grupos de riesgo.

Summary Microsporidia are protozoan parasites found in vertebrates and invertebrates. In the 80's they were recognized as a cause of diarrhea in HIV-AIDS patients and lately in patients with renal transplantation and immunocompetent patients (traveler's diarrhea). The objective of this paper is to communicate the first founding of this agent in a patient with HIV-AIDS and to contribute to determine the most important pathogenic and diagnostic characteristics of microsporidia. In 1998 the Parasitoloy Departament implemented colouring techniques for microsporidia, gram-chromotrope and trichrome. The first founding was observed in a HIV-AIDS patient with a 9 month-course of diarrhea; specific treatment was not performed since the patient carried a concomitant cryptococcal meningoencephalitis, that provoked his death. Recognition of theses oportunist agents as a cause of diarrhea in Uruguay contribute to determine the aetiologic diagnosis of chronic diarrhea in patients with HIV-AIDS. Specific colouring techniques should be incorporated in diagnosis algorithm for enteroparasitosis in risk groups.

Résumé Les microsporidiens ce sont des protozoaires connus depuis longtemps en tant que responsables de certains fléaux chez les vertébrés et les invertébrés. Aux années 80, on les reconnaît comme agents étiologiques de diarrhée en VIH-sida et quelque temps après, chez des greffés rénaux ainsi que chez des personnes immunocompétentes (diarrhée du voyageur). Le but de ce travail est de communiquer la première trouvaille de ces agents chez un patient VIH-sida ainsi que de contribuer à la connaissance des caractéristiques pathogéniques et diagnostiques les plus importantes de ces protozoaires. En 1998, au Département de Parasitologie, on a utilisé les techniques de coloration pour microsporidiens, gram-chromotrope et thrichomona. La première observation a été faite chez un patient VIH-sida, avec diarrhée de neuf mois d'évolution; aucun traitement spécifique n'a été fait puisqu'il présentait une méningo-encéphalite cryptococcose qui a accéléré sa mort. Le repérage de ces agents opportunistes responsables de diarrhée en Uruguay, contribue au diagnostique étiolo-gique de la diarrhée chronique chez des patients VIH-sida. Désormais, les colorations spécifiques de miscrospori-diens devarient être inclues parmi les techniques diagnostiques pour entéro-parasitoses dans des groupes de risque.

Mantenimiento en cultivo y caracterización de un microsporidio encephalitozoon hellem aislado en un paciente con SIDA y neumonía / Culture maintanance and characterization of a microsporidian encephalitozoon hellen isolated from AIDS patient with neumonia

Comunicamos la identificación, a nivel de especie, de un microsporidio aislado en cultivo celular a partir de un lavado broncoalveolar de un paciente con Sida y neumonía. La caracterización del aislado se realizó mediante: 1) estudio morfológico de microscopía óptica y electrónica, 2) estudio inmunológico con antisuero específicos, inmunofluorescencia indirecta (IFI) e inmunoblot (WB) y 3) estudio molecular tras reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con iniciadores especie-específicos diseñados a partir de la región que codifica la subunidad menor del ARN ribosomal. Las características ultraestructurales del aislado permitieron su identificación en el género Encephalitozoon. La identificación específica del microsporidio como Encephalitozoon hellem se realizó mediante IFI y WB, empleando suero policlonal de conejo anti-E. hellem (CDC:0291:V213), y mediante la amplificación por PCR del fragmento diagnóstico utilizando el par de iniciadores EHELF/EHELR específicos para esta especie. El aislado ha sido denominado EHVS-96 y se mantiene en cultivo continuo en células Vero-E6. Este es el primer aislamiento en cultivo y caracterización de E. hellem en España

Identificación de Enterocytozoon bieneusi en un paciente con colangitis esclerosante y SIDA / Identification of Enterocytozoon bieneusi in a patient with sclerosing cholangitis and AIDS

Enterocytozoon bieneusi es el microsporidio que más comúnmente ha sido identificado en pacientes con SIDA. En este trabajo, se describen las manifestaciones clínicas de un paciente con diarrea crónica, pancreatitis y colangitis esclerosante asociada con SIDA. Los estudios por imágenes, con ultrasonografía y colangiopancreatografia retrógrada endoscópica, revelaron alteraciones en la vía biliar intra-y extrahepática, idénticas a las observadas en colangitis esclerosante. Se detectó Enterocytozoon bieneusi en duodeno y duodeno peripapilar por microscopia óptica y se confirmó por la reación en cadena de la polimerasa (PCR) utilizando primers específicos en muestras incluidas en parafina. La infección con microsporidios se debería sospechar en nuestro país en pacientes con inmunodeficiencia severa y colangitis esclerosante asociada con SIDA.

Esporos de microsporidios en heces de dos niños HIV seronegativos de Tucumán, Argentina / Microsporidian spores in the stool specimens of two HIV-negative children from Tucuman, Argentina

La incidencia mundial de microsporidiosis intestinal en pacientes infectados por HIV es relevante. En contraste, son muy pocos los casos de infección del parásito en pacientes HIV negativos. Aquí se informa que en diciembre de 1994 fueron detectadas infecciones microsporidianas intestinales en dos niños, hermanos, de 16 y 33 meses de edad, HIV-negativos, desnutridos, nativos y residentes en la provincia de Tucumán, Argentina. El diagnóstico se logró empleando microscopía óptica para la detección de esporos microsporidianos en frotis de especímenes fecales coloreados con una nueva modificación del método de Ziehl-Neelsen modificado. El reconocimiento de los esporos estuvo basado en sus características morfológicas y propiedades tintoriales, y en su comparación con frotis testigo positivo para Enterocytozoon bieneusi coloreados con el método de Weber. Ambos niños mostraron definidos signos de desnutrición y otras patologías asociadas, lo que sumado a la falta de colaboración de sus progenitores para un adecuado estudio clínico, hicieron dificultoso poner en claro el rol desempeñado por los parásitos en estos casos. No obstante, las infecciones microsporidianas de los dos niños tuvieron evolución autolimitada

Aplicaçäo do método de coloraçäo tricrômica, em fezes diarréicas de infectados pelo HIV, para pesquisa de microsporídios / Trichrome staining method applied in stools from HIV-infected patients with diarrhorea, for microsporidia investigation

Os microsporídios säo implicados em várias manifestaçöes clínicas em pacientes com AIDS; os quadros diarréicos säo os mais comuns. O diagnóstico das microsporidioses dependia da microscopia eletrônica para exame de materiais obtidos por procedimentos invasivos. A técnica de coloraçäo tricrômica modificada permite o diagnóstico sem necessidade deste procedimento, através da microscopia óptica. No presente estudo foi aplicado o método de coloraçäo tricromica em fezes de 62 pacientes com diarréia, infectados pelo HIV ou com AIDS. Das 62 amostras, identificou-se esporos de microsporídios em uma. O trabalho corrobora a presença destes protozoários em nosso meio, associada a quadros de diarréia crônica em pacientes com AIDS e grave comprometimento imunológico, constata que este método de coloraçäo promove satisfatória visualizaçäo de esporos de microsporídios em fezes e aponta caminhos para novos estudos

Microsporidiosis humana / Human microsporidiosis

La microsporidiosis humana ha cobrado relevancia clínica con la aparición del virus de la inmunodeficiencia humana. La diarrea crónica constituye la expresión clínica más frecuente es estos pacientes aunque se han descrito infecciones localizadas en los distintos parénquimas del organismo e infecciones generalizadas. Las especies más relevantes son enterocytozoon bieneusi y encephalitozoon intestinalis. Se plantean como desafíos definir claramente los métodos diagnósticos y terapia adecuadapara ambas especies, una eventual terapia profiláctica primaria y/o secundaria y actualizar además las cifras de prevalencia en los distintos países

Estructuras ENE y su relación con la microsporidiosis: un hecho histórico / ENE structures and its relation with the microsporidiosis: historical event

Se hace un análisis histórico comparando lo observado desde 1982 en material diarreico en niños, internados en el Hospital Nacional de Niños, "Dr. Carlos Saénz Herrera" con los estudios actuales de la microsporidiosis. Según los estudios con microscopía electrónica por el método de barrido, existe similitud notable entre Enterocytozoon bieneusi y las conocidas con el nombre de estructuras E.N.E., (estructuras no identificadas eosinófilas) que hemos observado desde hace más de 15 años. Se analiza este hallazgo como una contribución al estudio de los microsporidios como agentes etiológicos de diarrea

Place des cryptosporidies des microsporidies dans les diarrhees des immunodeprimes

Cryptosporidium and Microsporidian play an important role in the diarrhoeic pathology of the immunocompromised patients. The study of 35 cases of cryptosporidiosis and 4 cases of intestinal microsporidiosis diagnosed in the parasitology laboratory of Rabta hospital in Tunis shows that cryptosporidiosis prevalence is 17.24% for AIDS patients, 3.45% for immunocompromised patients VIH[-], and microsporidiosis prevalence is 5.7% for patients with acquired immunodeficiency syndrome. Common points for these two parasitosis are: Clinical syndroms dominated by an acute diarrhea. A diagnosis based on specific techniques schawing the significance of the clinical orientation. Lach of an effective specific therapy

Estudio morfologico de Enterocytozoon bieneusi en pacientes con SIDA y diarrhea cronica / Morphological study of Enterocytozoon bineousi in patients with AIDS and chronic diarrhea

Microsporidia are protozoan parasites responsible for significant gastrointestinal disease in patients infected with the human inmunodeficiency virus. We reporte the clinical features of three patients with chronic diarrhea and intestinal microsporidiosis caused by Enterocytozoon bieneusi. The average value for CD4 in these patients was ó 50 cells/mm3. The spores were detected in smears from stool samples and duodenal aspirates stained with trichrome blue in all patiens. Light microscopy of semithin plastic sections revealed parasites and spores in the enterocytes and were associated with villous atrophy (2 out of 3). Thin section-electron microscopy showed a variety of developmental stages of the microsporidio. Patients treated with Albendazole had an unsatisfactory clinical response to therapy. Enterocytozzon bieneusi infection may be an important cause of diarrhea in patiens with AIDS in our country.

Microsporidioses humanas: desenvolvimento de métodos para o diagnóstico morfológico das microsporidioses intestinais em pacientes HIV-Positivos no município do Rio de Janeiro

As infecções intestinais por Enterocytozoon bieneuse e Septata intestinalis têm sido frequêntemente diagnosticadas em pacientes com SIDA/AIDS. Entretanto a detecção de esporos de microsporídios nas fezes é particularmente difícil quando o número dessas estruturas de resistência é pequeno. A partir de um método específico para a detecção de oocistos de Cryptosporidium, desenvolveu-se neste trabalho uma modificação que permitiu a concentração de esporos de microsporídios nas fezes. Foram estudados 140 pacientes do Hospital Evandro Chagas/FIOCRUZ e 95 do Hospital Universitário Pedro Ernesto/UERJ, todos soropositivos para o vírus da imunodeficiência humana(HIV). As amostras fecais desses pacientes foram investigadas pelo método direto e pelo método de concentração, desenvolvido neste trabalho. Todas as lâminas foram coradas pelas técnicas do Chromotrope e do Gram-Chromotrope, sendo essa última coloração desenvolvida e testada durante os trabalhos experimentais. Foram obtidas prevalências++. para microsporídios de 17,86 por cento (método direto) e 25 por cento (método de concentração) no grupo de indivíduos do HEC/FIOCRUZ e de 11,58 por cento no grupo investigado do HUPE/UERJ. A microscopia eletrônica de transmissão, realizada em fragmentos de biópsia duodenal de um paciente com diagnóstico positivo pela microscopia óptica, permitiu a identificação de esporos que apresentaram ultra-estrutura caracter161stica, compatível com a espécie E. bieneusi. O número de pacientes que foi diagnosticado com microsporidiose intestinal no presente estudo mostrou que os microsporídios são importantes agentes de infecção em indivíduos portadores do vírus HIV no Município do Rio de Janeiro